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广州恒琢科技有限公司
进入展位本发明提供了一种具有高精确性和高重复性的药物筛选方法,该方法包括如下步骤:1)制备图案化纤维电纺接收板,利用光刻蚀技术和直流磁控溅射技术,制备具有图案化金属银层的接收板;2)制备图案化电纺纤维,利用步骤1)所得物进行静电纺丝;3)制备PDMS腔体;4)将步骤2)和步骤3)所得物用等离子处理进行连接;5)将原代小鼠心肌细胞接种于步骤4)所得物中的图案化电纺纤维上,利用注射泵将培养基泵入步骤4)所得物的腔体,再将药物泵入,于药物泵入后20天内记录心肌细胞跳动频率,得到EC50值,根据EC50值对药物进行刷选。本发明实现了细胞在较小腔体内的正常生长的同时还具备筛选药物和重复使用的效果,具有高精确度和高重复性。
具体实施方式
以下通过实施例的具体实施方式对本发明的上述内容作进一步的详细说明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。
实施例1
1)制备图案化纤维电纺接收板:先在绝缘玻璃片上涂覆正性感光胶,再覆盖一层光掩模,利用光刻机进行刻蚀;再通过直流磁控技术在刻蚀后的玻璃片上沉积一层金属银,所沉积的金属银的形状为折线状,图案宽度为 80 μm;最后清洗掉剩余的正性感光胶;
2)制备图案化电纺纤维:将医用高分子聚合物用有机溶剂溶解,利用步骤1)所得物作为电纺接收板,通过静电纺丝技术制备图案化电纺纤维;控制所得纤维的直径为400 nm;
所述医用高分子聚合物为聚乳酸,所述有机溶剂为丙酮;
3)将SU-8放置在硅片上,利用光刻蚀技术,去掉其余的SU-8,保留宽为100μm、高为70μm的SU-8长方体作为模具;将熔融的PDMS置于所得模具上,待PDMS冷却后,去除模具,得到PDMS腔体;
4)通过等离子处理:打开设备真空室,装入前面制备好的沉积有图案化电纺纤维的玻璃片和PDMS腔体,开启射频驱动源灯丝电源,开启O2 气瓶瓶阀,等离子体处理30秒后,将步骤2)和步骤3)所得物紧密贴合,使其连接;
5)将8×106个原代小鼠心肌细胞接种于步骤4)所得物中的图案化电纺纤维上,利用注射泵将培养基泵入步骤4)所得物的腔体,流速为0.3 ml/h;再将0.1-1000 μM的药物泵入,于药物泵入后60分钟内记录心肌细胞跳动频率,得到EC50值,根据EC50值对药物进行刷选。筛选的药物为奎尼丁。
实施例2
1)制备图案化纤维电纺接收板:先在绝缘玻璃片上涂覆正性感光胶,再覆盖一层光掩模,利用光刻机进行刻蚀;再通过直流磁控技术在刻蚀后的玻璃片上沉积一层金属银,所沉积的金属银的形状为折线状,图案宽度为 40 μm;最后清洗掉剩余的正性感光胶;
2)制备图案化电纺纤维:将医用高分子聚合物用有机溶剂溶解,利用步骤1)所得物作为电纺接收板,通过静电纺丝技术制备图案化电纺纤维;控制所得纤维的直径为300 nm;
所述医用高分子聚合物为聚己内酯,所述有机溶剂为丙酮和二甲基甲酰胺(9:1 v/v);
3)将SU-8放置在硅片上,利用光刻蚀技术,去掉其余的SU-8,保留宽为50μm、高为100 μm的SU-8长方体作为模具;将熔融的PDMS置于所得模具上,待PDMS冷却后,去除模具,得到PDMS腔体;
4)通过等离子处理:打开设备真空室,装入前面制备好的沉积有图案化电纺纤维的玻璃片和PDMS腔体,开启射频驱动源灯丝电源,开启N2气瓶瓶阀,等离子体处理1分钟后,将步骤2)和步骤3)所得物紧密贴合,使其连接;
5)将6×106个原代小鼠心肌细胞接种于步骤4)所得物中的图案化电纺纤维上,利用注射泵将培养基泵入步骤4)所得物的腔体,流速为0.2 ml/h;再将0.1-1000 μM的药物泵入,于药物泵入后60分钟内记录心肌细胞跳动频率,得到EC50值,根据EC50值对药物进行刷选。筛选的药物为红霉素。
实施例3
1)制备图案化纤维电纺接收板:先在绝缘玻璃片上涂覆正性感光胶,再覆盖一层光掩模,利用光刻机进行刻蚀;再通过直流磁控技术在刻蚀后的玻璃片上沉积一层金属银,所沉积的金属银的形状为折线形,图案宽度为 20 μm;最后清洗掉剩余的正性感光胶;
2)制备图案化电纺纤维:将医用高分子聚合物用有机溶剂溶解,利用步骤1)所得物作为电纺接收板,通过静电纺丝技术制备图案化电纺纤维;控制所得纤维的直径为200 nm;
所述医用高分子聚合物为聚氨酯,所述有机溶剂为丙酮;
3)将SU-8放置在硅片上,利用光刻蚀技术,去掉其余的SU-8,保留宽为40μm、高为20μm的SU-8长方体作为模具;将熔融的PDMS置于所得模具上,待PDMS冷却后,去除模具,得到PDMS腔体;
4)通过等离子处理将步骤2)和步骤3)所得物连接;
5)将3×106个原代小鼠心肌细胞接种于步骤4)所得物中的图案化电纺纤维上,利用注射泵将培养基泵入步骤4)所得物的腔体,流速为0.1ml/h;再将0.1-1000 μM的药物泵入,于药物泵入后60分钟内记录心肌细胞跳动频率,得到EC50值,根据EC50值对药物进行刷选。筛选的药物为甲磺胺心定。
实施例4
利用实施例1方法,在心肌细胞培养10天后,测定心肌细胞的跳动频率,加入1 μM氟paiding醇后作用15分钟,然后洗掉氟paiding醇,10分钟后测定其心肌跳动频率,比较加入药物前的心肌跳动频率和洗脱药物后的心肌跳动频率。
实施例5
利用实施例2方法,在心肌细胞培养20天后,分别测定心肌跳动频率,之后加入10 μM氟paiding醇作用15分钟,然后再洗掉氟paiding醇,10分钟后测定其心肌跳动频率,比较加入药物前的心肌跳动频率和洗脱药物后的心肌跳动频率。
实验例1
通过实施例1方法得到奎尼丁药物的EC50为 51.31 μM,该数据和将0.1-1000 μM的奎尼丁通过小鼠灌胃实验得到的EC50为57.48 μM较为接近,而采用普通的没有图案的电纺纤维膜用于奎尼丁药物的EC50为28.44 μM。
实验例2
通过实施例2方法得到红霉素药物的EC50为 45.78 μM,该数据和将0.1-1000 μM的红霉素通过小鼠灌胃实验得到的EC50为48.66 μM较为接近,而采用普通的没有图案的电纺纤维膜用于红霉素药物的EC50为20.39 μM
实验例3
通过实施例3得到甲磺胺心定药物的EC50为 105.45 μM,该数据和将0.1-1000 μM的甲磺胺心定通过小鼠灌胃实验得到的EC50为110.72 μM较为接近,而采用普通的没有图案的电纺纤维膜用于甲磺胺心定药物的EC50为75.67 μM
实验例3
利用实施例1方法,发现在第10天时,加入1 μM氟paiding醇后,心肌细胞跳动频率在药物作用前后,分别为115次/min 和112次/min,而采用普通的没有图案的电纺纤维膜用于药物洗脱实验,心肌细胞跳动频率在药物作用前后,分别为104次/min 和63次/min。
实验例5
利用实施例2方法,在20天时,心跳频率为 110 次/min,在10 μM氟paiding醇的作用后,心肌细胞的跳动频率为 106 次/min,而采用普通的没有图案的电纺纤维膜用于药物洗脱实验,心肌细胞跳动频率在药物作用前后,分别为98次/min 和54次/min。